实时荧光聚合酶链反应结合融解曲线分析在α-地中海贫血基因诊断中的价值

• 作者: 刘敬忠 周艳 王战勇 王立荣 肖白 闫梅
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 实时聚合酶链反应 α-地中海贫血
• 年，卷（期）: 2005,（8）
• 所属期刊栏目: 新技术与新方法
• 页码范围: 858-861
• 页数: 4页
• 分类号: R4
• 字数: 3425字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:1009-9158.2005.08.031

摘要

目的建立自动化、高通量、准确快速检测缺失型α-地中海贫血基因型的技术.方法运用SYBR-Green1和ABI 7000热循环仪分别进行3个实时荧光定量聚合酶链反应(SYBR-Q-PCR),同时进行融解曲线(D.C)和Tm值分析,根据特定Tm值对应的D.C峰值判定基因型,即以该峰值≥Cut off 值定为PCR结果阳性.将PCR产物重组到T-载体,筛选到含正确扩增片段的克隆,以梯度稀释重组质粒DNA为模板,进行SYBR-Q-PCR得出标准曲线.从而定量未知标本.结果优化了3个SYBR-Q-PCR反应的引物及其浓度,热循环条件等.检测--SEA等位基因的PCR产物长800 bp,Tm=82.5℃±1℃.αα等位基因的PCR产物长206 bp,Tm=83.0℃±1℃.非--SEA等位基因的PCR产物长436 bp,Tm=84.0℃±1℃.重组质粒拷贝数在1至105范围内,其对数值与CT值均呈良好线性关系.该检测技术的灵敏度较常规PCR结合琼脂糖凝胶电泳法高出16倍以上.联合运用3个SYBR-Q-PCR反应可以为--SEA缺失携带者、缺失型HbH病、非缺失型HbH 病、α-地贫2纯合子、Bart′s水肿胎儿综合征做出基因诊断,并可用于产前诊断.结论该技术具有自动化程度高、不需荧光标记探针、成本低、易质控、防污染、高通量等优点,适于临床推广应用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘敬忠	首都医科大学附属北京朝阳医院基础医学研究中心	56	533	12.0	21.0
2	周艳	首都医科大学附属北京朝阳医院基础医学研究中心	16	227	8.0	15.0
3	肖白	首都医科大学附属北京朝阳医院基础医学研究中心	50	287	10.0	15.0
4	闫梅	首都医科大学附属北京朝阳医院基础医学研究中心	14	119	5.0	10.0
5	王立荣	中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所	6	77	3.0	6.0
6	王战勇	首都医科大学附属北京朝阳医院基础医学研究中心	10	220	3.0	10.0