VCAM-1基因的克隆及VCAM-1-pcDNA3.1(+)真核表达载体的构建

• 作者: 刘林 刘红 刘耀 孔佩艳 张怡 张曦 彭贤贵 陈幸华 高蕾
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 血管细胞黏附分子 真核表达载体 构建 人脐血基质细胞
• 年，卷（期）: 2005,（9）
• 所属期刊栏目: 血液病专题
• 页码范围: 1310-1312
• 页数: 3页
• 分类号: Q785
• 字数: 2653字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2005.09.014

摘要

目的克隆人血管细胞黏附分子(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1) cDNA全长,并构建VCAM-1-pcDNA3.1(+)真核表达载体.方法采用半巢式RT-PCR从人脐静脉内皮细胞系HUV-EC-C中分三段扩增得到VCAM-1cDNA片段,采用重叠延伸剪切技术(SOE)并经SacⅠ酶切、T4连接酶连接获得VCAM-1完整片段,克隆至pcDNA3.1(+)真核表达载体,得到VCAM-1-pcDNA3.1(+)真核表达载体.结果酶切及测序结果证明VCAM-1-pcDNA3.1(+)真核表达载体构建成功.结论成功扩增人VCAM-1基因,构建VCAM-1-pcDNA3.1(+)真核表达载体,为探索VCAM-1修饰人脐血基质细胞(human umbilical cord blood stromal cell,hUCBSC)重建造血微环境奠定了实验基础.