人B7-H1-Fc融合分子的构建及其在CHO细胞中的表达与鉴定

• 作者: 张华欣 段文元 白云 黄钢
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: B7-H1-Fc 基因工程 真核表达
• 年，卷（期）: 2005,（22）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 2197-2200
• 页数: 4页
• 分类号: R392.11|R394-33|R394.2
• 字数: 2691字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2005.22.001

摘要

目的利用基因工程手段构建hB7-H1-Fc重组cDNA,用真核表达系统制备有活性的hB7-H1-Fc融合蛋白.方法 PCR方法从活化的人T细胞cDNA文库中扩增编码人B7-H1膜外区的cDNA序列, 将其与人IgG1Fc和pCI-neo片段连接,构建成hB7-H1-Fc重组表达载体.用脂质体法转染CHO细胞, 夹心ELISA法检测上清中融合蛋白hB7-H1-Fc的表达,经Protein A 亲合层析纯化,SDS-PAGE、免疫印迹鉴定表达产物. 结果 PCR扩增得到编码人B7-H1膜外区的727 bp基因片段,与hIgG1Fc的cDNA片段一起连接并插入pCI-neo表达质粒.重组质粒转染CHO细胞后, 夹心ELISA法检测显示培养上清中有hB7-H1-Fc蛋白表达.纯化后的hB7-H1-Fc蛋白经SDS-PAGE和免疫印迹鉴定其分子质量约51.76×103,与理论预测值相符. 结论成功构建了hB7-H1-Fc重组表达载体,利用哺乳动物细胞CHO表达出有活性的hB7-H1-Fc融合蛋白,为进一步研究B7-H1分子在免疫耐受、自身免疫性疾病中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	段文元	第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室	15	58	5.0	7.0
2	白云	第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室	99	429	11.0	15.0
3	黄钢	第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室	20	95	5.0	9.0
4	张华欣	第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室	3	16	2.0	3.0