建立人颗粒溶素基因表达含量荧光定量PCR检测方法的研究

• 作者: 仲人前 孔宪涛 朱晔 王皓 谭龙益 谷明莉 邓安梅 钱琤 陈孙孝 陈燕
• 来源期刊: 中华临床医学卫生杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 颗粒溶素 聚合酶链反应 外周血单个核细胞
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 页码范围: 1-4
• 页数: 4页
• 分类号: R392

摘要

目的建立人颗粒溶素（granulysin.GNLY）mRNA荧光定量的检测方法，构建克隆载体pMD18-T-GNLY作为定量模板，在ABI 7900HT型实时荧光定量PCR检测仪上通过荧光强度达到一定阈值时的循环数来定量起始模板，来建立实时荧光定量RT-PCR方法，并检测了40名正常健康献血者外周血中GNLY的表达。结果本方法的动态检测范围为10^3～10^9拷贝／μg RNA（r^2≥0.996），内参18s rRNA的动态检测范围为10^3～10^8拷贝/μg RNA（r^2≥0.996）；低值的批内、批间的重复性分别为10.33％和17.32％，高值的批内、批间的重复性分别为6．41％和8．46％；而40名正常健康人外周血的PBMCs中均有GNLY mRNA的表达，范围为3.12×10^6～4．32×10^7拷贝／μgRNA，均值为（2．0±1．3）×10^7拷贝／μg RNA。结论成功建立了人GNLY基因表达含量的荧光定量检测方法，检测结果可用绝对拷贝数表示，定量准确可靠。GNLY mRNA荧光定量测定方法的建立为研究GNLY mRNA表达水平与感染性疾病免疫机制的关系奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈孙孝	上海第二军医大学长征医院实验诊断科	8	41	4.0	6.0
2	孔宪涛	上海第二军医大学长征医院实验诊断科	20	163	9.0	12.0
3	仲人前	上海第二军医大学长征医院实验诊断科	22	139	7.0	11.0
4	陈燕	上海第二军医大学长征医院实验诊断科	7	14	2.0	3.0
5	邓安梅	上海第二军医大学长征医院实验诊断科	10	42	4.0	6.0
6	王皓	上海第二军医大学长征医院实验诊断科	3	9	1.0	3.0
7	钱琤	上海第二军医大学长征医院实验诊断科	3	2	1.0	1.0
8	朱晔	上海第二军医大学长征医院实验诊断科	1	0	0.0	0.0
9	谷明莉	上海第二军医大学长征医院实验诊断科	1	0	0.0	0.0
10	谭龙益	上海第二军医大学长征医院实验诊断科	1	0	0.0	0.0