人PD-1基因克隆及其在L929基因转染细胞上的表达

• 作者: 张学光 施勤 明志君 肖淑宁 陈永井
• 来源期刊: 江苏医药
• 学科: 医学
• 关键词: PD-1基因 逆转录病毒
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 561-563
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 字数: 2410字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-3685.2006.06.023

摘要

目的克隆人PD-1基因,构建含有该目的基因的重组逆转录病毒载体,并转染入L929细胞,获得稳定高表达PD-1分子的L929细胞.方法用PCR法从pGEX-5X-3-PD-1扩增出PD-1基因,通过双酶切(PstI BamHI)装入逆转录病毒载体pGEZ Term中,脂质体法共转染包装细胞293T,用含有完整病毒颗粒的293T细胞的培养上清感染L929细胞,72 h后,加入Zeocin进行筛选,挑选出能稳定表达PD-1分子的L929细胞株.结果成功克隆了人PD-1基因,构建了含PD-1基因的重组逆转录病毒载体,包装出具有感染能力的重组PD-1逆转录病毒,筛选出具有稳定表达人PD-1分子的L929基因转染细胞.经流式细胞仪检测:PD-1分子在L929基因转染细胞中具有高表达,达到97.6%.结论构建了含人PD-1基因重组逆转录病毒的载体,筛选出稳定表达人PD-1分子的L929细胞株.