可溶性HLA-A*0203-BSP原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的高效表达

• 作者: 何贤辉 徐丽慧 李丰耀 查庆兵 贾仟涛 迟晓云
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人类白细胞抗原 胞外域 融合蛋白 原核表达 包涵体
• 年，卷（期）: 2006,（9）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 5-10
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 4076字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8135.2006.09.002

摘要

目的:构建H白CHLA-A*0203-BSP的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达.方法:以RT-PCR方法从HLA-A2+供者外周血单个核细胞(PBMC)中克隆HLA-A*0203重链基因的cDNA,并测序鉴定,然后以PCR方法构建HLA-A*0203-BSP的原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中诱导表达并以免疫印迹鉴定.结果:DNA测序显示,从3名HLA-A2+供者PBMC中克隆的cDNA中,只有从供者2获得编码HLA-A*0203重链基因的cDNA.将编码重链胞外域1～276的序列和编码BSP的序列融合,构建HLA-A*0203-BSP融合蛋白的原核表达载体并经测序验证.该融合蛋白在BL21(ED3)中获得高效表达,约占菌体总蛋白的30%;产物相对分子质量约为34kDa,与理论大小一致.Western印迹分析显示融合蛋白完全存在于包涵体中.结论:成功克隆HLA-A*0203重链基因的cDNA,构建HLA-A*0203-BSP融合蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得高效表达,为制备HLA-A*0203四聚体打下基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐丽慧	暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心	69	509	13.0	20.0
5	迟晓云	暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心	8	15	3.0	3.0
6	李丰耀	暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心	7	9	2.0	2.0
7	贾仟涛	暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心	6	9	2.0	2.0
8	查庆兵	暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心	28	71	4.0	7.0