BDNF基因重组逆转录病毒表达载体pLEGFP-BDNF的构建与鉴定

• 作者: 冷水龙 宣爱国 李佳楣 罗秀梅 黄文燕 龙大宏
• 来源期刊: 中华神经医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 脑源性神经营养因子 逆转录病毒载体 基因重组
• 年，卷（期）: 2006,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 462-464
• 页数: 3页
• 分类号: Q34
• 字数: 2717字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1671-8925.2006.05.008

摘要

目的构建脑源性神经营养因子(BDNF)基因重组逆转录病毒表达载体.方法根据BDNF基因已知序列,设计合成一对引物并导入HindⅢ和BamH Ⅰ酶切位点;从大鼠海马组织提取总RNA,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)获得编码BDNF的基因片段,与克隆载体pMD 18-T Simple连接构建pMDT-BDNF质粒;经HindⅢ、BamH Ⅰ双酶切,获得BDNF基因片断再克隆至逆转录病毒载体pLEGFP-N1中构建重组质粒pLEGFP-BDNF.结果限制性内切酶酶切分析和PCR法鉴定表明为正确重组子,测序结果证实与已知序列吻合. 结论构建的重组逆转录病毒表达载体pLEGFP-BDNF含有序列正确的大鼠BDNF基因,可以作为今后治疗老年性痴呆动物模型转基因实验的基因来源.