肝癌细胞特异性结合双价抗体的构建表达与鉴定

• 作者: 代维 余冰 刁智娟 刘静 沈关心 沈昕 肖代雯 赵晓蓉 邢薇 雷萍 黄宇
• 来源期刊: 医药导报
• 学科: 医学
• 关键词: 单链抗体 肝癌细胞 双价抗体
• 年，卷（期）: 2006,（7）
• 所属期刊栏目: 疫苗及分子生物药物专栏
• 页码范围: 642-645
• 页数: 4页
• 分类号: R73
• 字数: 3272字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1004-0781.2006.07.018

摘要

目的构建和表达与肝癌细胞特异结合的双价单链抗体(bivalent single-chain Fv,BsFv),并鉴定该双价抗体的生物活性.方法以与肝癌细胞特异结合的单链抗体(scFv)为模板,设计引物引入中间连接肽(G4S)及酶切位点AscI,通过聚合酶链反应(PCR)方法扩增出两个scFv片段,将其连入原核表达载体pAB1;构建的表达载体转化大肠埃希菌TG1,挑取单克隆细菌进行扩增,提取质粒酶切、测序鉴定.阳性菌经IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE,Western blot鉴定,间接免疫荧光流式细胞术(FACS)测定与肝癌细胞特异结合的特性.结果经酶切鉴定以及DNA测序结果表明该BsFv构建成功,SDS-PAGE、Western blot鉴定表明表达蛋白相对分子量与BsFv理论值一致,且表达产物同亲本scFv比较,与肝癌细胞特异结合活性增强.结论 BsFv构建成功,BsFv较scFv具有明显优势,为其用于临床肿瘤的诊断和治疗奠定了基础.