ECM1-pEGFP-N2 真核表达载体的构建及其在人乳腺癌细胞系MCF-7中的表达

• 作者: 仲人前 侯彦强 倪健 娄加陶 孔宪涛 彭亮
• 来源期刊: 世界肿瘤杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 细胞外基质蛋白1 绿色荧光蛋白 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2006,（4）
• 所属期刊栏目: 研究原著
• 页码范围: 233-236,252
• 页数: 5页
• 分类号: R737.9|R-33
• 语种: 中文

摘要

目的 构建细胞外基质蛋白1基因(ECMl)的真核表达载体ECM1-pEGFP-N2,检测其在人乳腺癌细胞系MCF-7中表达.方法 采用PCR方法,以ECM1 cDNA为模板,扩增出ECM1基因,用BglⅡ和Kpn Ⅰ双酶切ECM1基因和pEGFP-N2载体,连接酶切目的片段,转化大肠杆菌DH5,筛选阳性克隆酶切、测序鉴定;利用脂质体介导的转染技术转染MCF-7细胞,荧光显微镜检测报告基因表达产物EGFP,免疫组化检测ECM1蛋白表达.结果 利用PCR克隆出约1.6kb的ECM1基因;PCR鉴定、酶切鉴定及测序结果证实成功构建ECM1-pEGFP-N2真核表达载体;转染MCF-7细胞后,可在细胞内观察到报告基因产生的绿色荧光,用免疫组化方法可检测到ECM1蛋白.结论 成功构建了ECM1-pEGFP-N2真核表达载体,并在MCF-7细胞中表达,为进一步研究ECM1的功能奠定了基础.