人肌酸激酶MM同工酶在大肠杆菌中的高效可溶性表达及纯化研究

• 作者: 夏铁安 徐国宾 杨文双 黄燕
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人肌酸激酶MM同工酶 校准品 金属螯合亲和层析 稳定性
• 年，卷（期）: 2006,（4）
• 所属期刊栏目: 研究生园地
• 页码范围: 302-305
• 页数: 4页
• 分类号: R446.1
• 字数: 3935字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-764X.2006.04.023

摘要

目的构建肌酸激酶MM同工酶原核表达系统,纯化重组酶蛋白并对其稳定性进行研究,为其作为参考品或校准品应用于临床奠定基础.方法提取胎儿心肌组织总RNA,反转录扩增人肌酸激酶M亚基基因,构建pET-15b-CK、E.coli BL21(DE3)pLysS原核表达系统,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达.利用重组蛋白的组氨酸标签(His-tag)进行金属螯合亲和层析纯化,观察重组酶在不同保存条件下的稳定性.结果重组质粒经酶切及测序鉴定与预期相符,诱导表达后细菌裂解液上清酶活性可达280 000 U/L,纯化后SDS-PAGE在分子量45 000处显示单一蛋白条带,在-20 ℃加入70 g/L BSA、1 mmol/L DTT、2 mmol/L EDTA的PBS(pH 7.4)保存体系中,重组酶活性在30 d观察期内基本不变.结论成功表达并纯化了人肌酸激酶MM同工酶,重组酶稳定性良好,初步具备了作为基因工程人源酶校准品的基本特点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐国宾	北京大学第一医院检验科	130	2817	24.0	49.0
2	夏铁安	北京大学第一医院检验科	50	1046	17.0	31.0
3	杨文双	北京大学第一医院检验科	7	54	5.0	7.0
4	黄燕	北京大学第一医院检验科	8	30	3.0	5.0