金黄色葡萄球菌肠毒素A基因克隆及表达

• 作者: 倪培华 吴洁敏 陈悦
• 来源期刊: 检验医学
• 学科: 医学
• 关键词: 金黄色葡萄球菌肠毒素A 原核表达载体 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 微生物学检验论著
• 页码范围: 113-116
• 页数: 4页
• 分类号: R378.1
• 字数: 2975字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8640.2006.02.011

摘要

目的对金黄色葡萄球菌肠毒素A基因(SEA)进行克隆、鉴定与表达,为制备单抗、诊断试剂及进一步深入研究SEA的功能奠定基础.方法用聚合酶链反应(PCR)扩增SEA基因,将扩增的产物连接于测序载体pMD18-T上,经测序反应确定无误,酶切后将SEA基因与原核表达载体pET42b(+)构建表达SEA的重组质粒,将重组质粒先转化入大肠杆菌DH5α内并提取质粒,经双酶切鉴定后,再转化入表达宿主大肠杆菌BL21菌株内,对转化菌株进行诱导后,破菌,进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE).结果构建了表达载体pET42b(+)-SEA,并获得高效表达,表达的蛋白质相对分子质量为27 000,重组蛋白(rSEA)在37 ℃、25℃经异丙基硫化-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导时均以包涵体形式存在.结论 SEA基因成功克隆到表达质粒内并表达,为制备单抗、诊断试剂及其致病机制研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	倪培华	上海交通大学医学院附属瑞金医院检验系	104	442	10.0	13.0
2	吴洁敏	上海交通大学医学院附属瑞金医院检验系	21	48	5.0	6.0
3	陈悦		23	119	7.0	9.0