组织型纤溶酶原激活因子基因真核表达质粒的构建及其体外表达研究

• 作者: 刘小斌 张凯伦 王家宁 蒋雄刚 黄永章
• 来源期刊: 华中科技大学学报(医学版)
• 学科: 医学
• 关键词: 组织型纤溶酶原激活因子 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2006,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 350-353
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3740字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-0741.2006.03.020

摘要

目的构建人组织型纤溶酶原激活因子(t-PA)基因的新型真核表达载体pcDNA3.1-Myc His B(-)/t PA,并观察其在人脐静脉内皮细胞株(hUVEC)中的表达情况.方法将t-PA基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1-MycHis B(-)中,经脂质体介导将pcDNA3.1-Myc-His B(-)/t-PA导入hUVEC,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测t-PA基因在转染细胞内的转录水平,免疫印迹法(Western blot)检测转染细胞t-PA蛋白表达,底物发色法检测转染细胞t-PA活性.结果经双酶切鉴定和测序证实已将t-PA基因DNA片段正确插入到真核表达载体中,转基因组、空载体组、转绿色荧光蛋白组和空白对照组hUVEC t-PA mRNA相对含量分别(0.92±0.22)、(0.32±0.17)、(0.35±0.17)和(0.27±0.17),转t-PA基因组明显高于对照各组,其细胞培养上清t-PA活性分别为(48.90±8.06)、(5.44±1.09)、(5.17±0.95)和(5.01±1.03)U/106细胞·24h,转t-PA基因组t-PA活性明显高于各对照组(均P＜0.01).用抗Myc标签抗体可检测到转t-PA基因组外源性蛋白质表达,对照组则为阴性.结论成功构建pcDNA3.1-Myc-His B(-)/t-PA基因新型真核表达载体,并能在hUVEC中表达,从而为血栓性疾病的基因治疗研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张凯伦	华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管外科	123	382	9.0	11.0
2	蒋雄刚	华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管外科	49	120	6.0	7.0
3	刘小斌	华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管外科	6	17	3.0	4.0
4	王家宁	湖北省郧阳医学院临床医学研究所	3	41	2.0	3.0
5	黄永章	湖北省郧阳医学院临床医学研究所	1	2	1.0	1.0