猪IFN-γ mRNA竞争性RT-PCR定量检测方法的建立

• 作者: 张锋钢 朱和鸣 沈志强 王茹 管宇 谢印乾 高云英
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 IFN-γ基因 定量检测 RT-PCR
• 年，卷（期）: 2006,（12）
• 所属期刊栏目: 基础兽医学
• 页码范围: 1000-1004
• 页数: 5页
• 分类号: S852.42
• 字数: 4054字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2006.12.013

摘要

无菌分离的猪外周血单个核细胞(PBMC),经ConA体外刺激培养15 h后提取细胞总RNA.以此总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增到了435 bp的IFN-γ基因.把扩增到的IFN-γ基因与pMD18-T载体连接,构建了pMD-IFN435重组质粒.用另一对引物对重组质粒pMD-IFN435内部进行PCR扩增,得到了257 bp(含PstⅠ酶切位点)的基因片段,将此基因片段连接到pMD18-T载体上构建了pMD-IFN257重组质粒.将pMD-IFN257双酶切(PstⅠ+SalⅠ)后回收的目的片段与pMD-IFN435双酶切(PstⅠ+SalⅠ)后回收的目的片段连接,得到了含有367bp目的片段的重组质粒pMD-IFN367,即内标准DNA模板.以定量后的pMD-IFN367与2倍梯度稀释的pMD-IFN435进行竞争PCR扩增,建立了能够准确、方便定量检测猪IFN-γmRNA的标准竞争曲线的线性回归方程(y=0.414x-1.864).

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	管宇		38	181	9.0	11.0
2	沈志强		525	1950	18.0	25.0
3	高云英	西北农林科技大学动物科技学院	20	392	11.0	19.0
4	王茹		5	4	1.0	2.0
5	谢印乾	西北农林科技大学动物科技学院	12	88	4.0	9.0
6	张锋钢	西北农林科技大学动物科技学院	3	48	2.0	3.0
7	朱和鸣		1	1	1.0	1.0