hKCNE5 基因克隆及其重组腺病毒表达载体的构建

• 作者: 刘懿 夏敏 杨奕清 林捷 董雄剑 陈义汉
• 来源期刊: 同济大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: KCNE5 克隆 转基因 腺病毒
• 年，卷（期）: 2006,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: Q78|R541.7+5
• 字数: 3563字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0392.2006.05.001

摘要

目的 本研究旨在克隆人 KCNE5(hKCNE5)基因,构建其重组腺病毒表达载体,以便研究 hKCNE5 基因过度表达对心房颤动的防治作用.方法 首先利用 PCR 技术克隆 hKCNE5 基因,并将 hKCNE5 基因亚克隆到腺病毒穿梭质粒 pShuttle-CMV;然后将该重组质粒线性化后电转化含有复制缺陷型腺病毒 pAdEasy-1(Ad) 的 BJ5183-AD-1 细胞,经过同源重组,获得复制缺陷型重组腺病毒 hKCNE5-Ad,并经酶切鉴定、序列分析证实无误;接着将其转染超级感受态细胞 XL10-Gold 扩增、纯化、线性化,再感染 AD-293 细胞进行包装便可获得大量复制的重组腺病毒 hKCNE5-Ad.结果 hKCNE5基因被成功克隆后正确插入腺病毒载体 Ad,其序列与 GenBank 公布的一致;hKCNE5-Ad 可感染 AD-293 细胞并能在 AD-293 细胞内进行高效复制;收集含有 hKCNE5-Ad 的 AD-293 细胞悬液,-80℃保存备用.结论 本研究成功地克隆了 hKCNE5 基因,构建了 hKCNE5 基因重组腺病毒表达载体,为进一步研究 hKCNE5 基因过度表达对心房颤动的防治作用奠定了基础.