人源性抗HBsAg单链Fab基因在Pichia pastoris中的表达

• 作者: 向军俭 唐勇 王宏 粟宽源 邓宁
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: HBsAg 单链Fab 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 抗体工程
• 页码范围: 71-73
• 页数: 3页
• 分类号: R373.2+1
• 字数: 3174字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2006.01.021

摘要

目的:研究重组Fab的结构与亲和活性的关系.方法:通过重叠PCR,将人源性抗HBsAg Fab的H和L链基因融合构建单链Fab基因,并将其转入毕赤酵母表达载体pPICZαA中.以单链Fab基因表达载体通过氯化锂转化法转化毕赤酵母GS115.将获得的重组酵母在摇瓶中培养进行重组单链Fab的可溶性表达.表达上清经硫酸铵沉淀及亲和层析纯化后,用直接ELISA检测表达产物和纯化Fab的活性.结果:SDS-PAGE和Western blot分析显示,单链Fab在毕赤酵母中获得分泌型表达.薄层扫描显示,在摇瓶中培养毕赤酵母表达的单链Fab约为5～10 mg/L.经亲和层析纯化获得纯度达97.8%的重组单链Fab.经直接ELISA测定的结果显示,重组单链Fab具有较好的结合HBsAg的活性.结论:通过重叠PCR构建的融合单链Fab基因,可成功地在毕赤酵母中获得分泌型表达,表达产物具有较好的结合HBsAg的活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王宏	暨南大学生命科学技术学院分子免疫学与抗体工程研究中心	52	320	11.0	16.0
2	向军俭	暨南大学生命科学技术学院分子免疫学与抗体工程研究中心	121	1163	18.0	26.0
3	邓宁	暨南大学生命科学技术学院分子免疫学与抗体工程研究中心	60	325	11.0	15.0
4	唐勇	暨南大学生命科学技术学院分子免疫学与抗体工程研究中心	84	866	17.0	23.0
5	粟宽源	解放军第458医院传染病研究中心	9	72	5.0	8.0