突变人GM-CSF基因在大肠杆菌中的表达及纯化

• 作者: 王骊丽 白泉 耿信笃 马莉
• 来源期刊: 西北大学学报（自然科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 表达 大肠杆菌 离子交换色谱 分离纯化
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 化学与化学工程
• 页码范围: 63-67
• 页数: 5页
• 分类号: R318
• 字数: 3009字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-274X.2006.01.015

摘要

目的构建重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)的高效表达质粒,将其表达产物用于分离纯化的研究.方法用人外周血单核细胞获得总RNA作为模板和修饰的5'端密码子的引物经RT-PCR反应扩增到人GM-CSF基因,插入温控表达载体pDH构建了突变的hGM-CSF表达质粒,并将在E.coli中获得表达的突变rhGM-CSF包含体8 mol/L脲提取液进一步用离子交换色谱柱分离纯化.结果rhGM-CSF在大肠杆菌表达占菌体总蛋白量的22%,用弱阴离子交换色谱对rhGM-CSF的工程菌表达产物8 mol/L脲提取液直接经35 min分离纯化,所得产物纯度可达95%,质量回收率可达到60%.结论这表明用离子交换色谱可进行rhGM-CSF的复性与同时纯化.