以鼠源重链Fd片段为模板导向筛选人源性抗γ-精浆蛋白抗体轻链

• 作者: 包国强 张思河 张青 易静 苏明权 郝晓柯
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 噬菌体抗体库 导向筛选 前列腺癌
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 抗体工程
• 页码范围: 196-199
• 页数: 4页
• 分类号: R392.11
• 字数: 3398字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2006.02.019

摘要

目的: 以鼠源抗γ-sm抗体重链Fd片段为模板, 筛选人源性抗人γ-精浆蛋白抗体轻链.方法: 利用RT-PCR从前列腺癌患者外周血淋巴细胞扩增出全套的人抗体轻链基因, 克隆入含鼠源性抗γ-sm抗体重链Fd片段的噬粒载体pComb3X/mFd中, 电转化大肠杆菌XL1-Blue后建立人-鼠杂合的Fab抗体库.通过稀释滴定、限制性酶切和随机测序, 对所建杂合库的库容、重组率和多样性分别进行鉴定, 以M13K07辅助噬菌体超感染, 利用亲和纯化的γ-sm为抗原, 对挽救展示的噬菌体抗体库进行3轮淘筛和克隆鉴定.最后对筛选出的杂合抗体进行初步的功能检测.结果: 构建成功1.2×107CFU、重组率为90%、多样性好的杂合人-鼠噬菌体抗体库.利用纯化的γ-sm 3轮亲和淘筛后, 5个克隆成功诱导表达特异性的pIII融合抗体.ELISA进一步检测表明, 5个克隆均呈特异性阳性反应, 其中2个克隆亲和力较高, 测序显示其所含轻链基因序列完全相同, 可变区来源于IGKV4-1*01胚系基因家族.结论: 利用鼠源Fd片段为模板, 导向筛选杂合噬菌体库, 成功筛选到人源性抗人γ-精浆蛋白抗体轻链.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郝晓柯	第四军医大学西京医院检验科	322	1751	18.0	23.0
2	张思河	第四军医大学基础部细胞工程研究中心	23	106	6.0	9.0
3	包国强	第四军医大学唐都医院普通外科	52	295	9.0	14.0
4	苏明权	第四军医大学西京医院检验科	226	1052	14.0	20.0
5	易静	第四军医大学西京医院检验科	30	68	4.0	6.0
6	张青	第四军医大学西京医院检验科	35	119	6.0	8.0