胃癌相关基因GCRG213真核表达载体的构建及其对胃癌细胞生长特性的影响

• 作者: 伍银桥 吴本俨 尤纬缔 王卫华 王孟薇 王珊 高利利 黄海力
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 胃肿瘤 基因,GCRG213 转染 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2006,（9）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 881-884
• 页数: 4页
• 分类号: R73
• 字数: 3236字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2006.09.014

摘要

目的 研究胃癌相关基因GCRG213正义、反义转染对胃癌细胞MKN45生长特性的影响.方法 将从pGEM-T质粒上扩增出的胃癌相关基因GCRG213的DNA片段,按正向、反向克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+).测序正确的重组子pcDNA3.1-a(含GCRG213正向克隆)、pcDNA3.1-b(含GCRG213反向克隆)和空载体经脂质体转染人胃癌细胞系MKN45细胞,采用半定量RT-PCR及Western blot方法比较转染不同质粒的MKN45细胞中 GCRG213在mRNA和蛋白质水平上的表达差异.选取稳定转染不同质粒的MKN45细胞,采用细胞计数法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪分析细胞的增殖状态,Annexin V FITC /PI双标记法检测凋亡细胞.结果 经测序证实,GCRG213正向克隆和反向克隆正确插入真核表达载体pcDNA3.1(+).与对应的空载体比较,转染pcDNA3.1-a的MKN45细胞中mRNA的表达上调35.4%,蛋白的表达上调49.4%,而转染pcDNA3.1-b的MKN45细胞中mRNA的表达下调32.1%,蛋白的表达下调50.3%.转染了GCRG213正向克隆的MKN45细胞生长增殖速度加快,凋亡率下降,而转染了GCRG213反向克隆的MKN45细胞生长增殖速度减慢,凋亡率增加.结论 胃癌相关基因GCRG213可促进肿瘤细胞的生长,抑制肿瘤细胞凋亡,可能是恶性肿瘤癌变的促进因素之一.