实时荧光定量RT-PCR检测原发性肝细胞癌中Dicer mRNA的表达

• 作者: 侯丽娜 王华梁 王爱华 王玉兰 陈允硕
• 来源期刊: 第二军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: Dicer 癌,肝细胞 实时荧光定量RT-PCR
• 年，卷（期）: 2006,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 842-844
• 页数: 3页
• 分类号: R735.7
• 字数: 2662字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0258-879X.2006.08.009

摘要

目的:建立Dicer mRNA 表达量检测的实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)系统,检测肝癌细胞系与20例原发性肝细胞癌(primary hepatocellular carcinoma,PHC)组织中Dicer mRNA的表达水平.方法:根据Dicer mRNA的全序列设计特异性引物,结合荧光染料SYBR Green Ⅰ,RT-PCR扩增目的片段并实时检测产物的荧光强度, 进行熔解曲线分析排除非特异性扩增,根据标准品绘制标准曲线,由软件自动计算出待测样品Dicer mRNA的准确含量,并以Dicer mRNA和18S rRNA含量的比值作为Dicer表达水平的指标.结果:该方法检测的线性范围为5×102～5×109 copies/μl,样本的批内变异系数与批间变异系数为4.13%～19.72%和6.25%～18.76%.Dicer mRNA在HBV阳性肝癌细胞系HepG2.2.15和HBV阴性肝癌细胞系HepG2的表达水平明显低于正常肝细胞系WRL-68(P＜0.05);在PHC组织的表达水平明显低于癌旁配对组织(P＜0.05).结论:该方法具有较好的灵敏度、特异性和重复性.Dicer mRNA 表达量在肝癌细胞系和PHC组织中的检测为以后更好的研究PHC的发病机制奠定了理论基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王玉兰	第二军医大学东方肝胆外科医院检验科	4	25	3.0	4.0
2	王爱华	第二军医大学东方肝胆外科医院检验科	36	145	6.0	10.0
3	陈允硕		7	75	4.0	7.0
4	侯丽娜	第二军医大学东方肝胆外科医院检验科	5	14	3.0	3.0
5	王华梁	第二军医大学东方肝胆外科医院检验科	10	54	4.0	7.0