汉坦病毒S片段荧光定量PCR参考标准品的构建

• 作者: 周欣 李燕婷 沈微娟 沈荣明 瞿涤
• 来源期刊: 上海预防医学
• 学科: 医学
• 关键词: S片段 实时荧光定量PCR 标准品
• 年，卷（期）: 2006,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 432-434
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 字数: 2315字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-9231.2006.09.002

摘要

[目的] 构建汉坦病毒S片段标准品,用于实时荧光定量PCR检测汉坦病毒. [方法] 对S片段基因进行序列分析,利用引物设计软件设计出一对引物和一条荧光探针,提取病人总RNA,逆转录为cDNA,经PCR扩增,产物纯化后与PMD 18-T Vector连接,转化到大肠杆菌DH5α,筛选得到标准品的质粒,提取质粒并进行定量. [结果] 重组S片段基因质粒进行荧光定量PCR扩增出现强烈的荧光值增长,表明基因已成功克隆.以不同稀释水平的标准品进行扩增,统计学分析显示Ct 值与标准品浓度的对数存在良好线性关系,回归系数在0.99以上.成功制备并获得稳定的S片段重组质粒. [结论] 该方法能大量制备质粒标准品,如何进行荧光RT-PCR条件的优化是关键所在.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	瞿涤	复旦大学上海医学院医学分子病毒学教育部重点实验室	34	128	7.0	9.0
2	李燕婷		92	1054	20.0	28.0
3	沈荣明		13	73	5.0	8.0
4	沈微娟		12	57	4.0	7.0
5	周欣	复旦大学上海医学院医学分子病毒学教育部重点实验室	5	388	2.0	5.0