人可溶性TALL-2突变体的原核表达及纯化

• 作者: 何凤田 刘宝英 李蓉芬 郑英如 黄刚 龚薇
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: sTALL-2 突变体 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2006,（23）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 2346-2348
• 页数: 3页
• 分类号: Q503|Q516|Q591.2
• 字数: 3031字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2006.23.015

摘要

目的 制备人可溶性(soluble TNF and apoptosisligand-relatedleukocyte-expressedligand 2,sTALL-2)的3种突变体,为寻找sTALL-2的竞争抑性制剂创造条件.方法 采用一步反向PCR,将编码sTALL-2第187位谷氨酰胺(Gln)的核苷酸序列分别置换为丝氨酸(Ser)、天冬氨酸(Asp)、精氨酸(Arg)的编码序列,测序正确后,亚克隆到原核表达载体pQE-80L;经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blotting鉴定表达产物,Ni2+-NTA柱层析纯化目和蛋白,进而经Sepha-dex G-75柱层析,获得同源三聚体分子.结果 经一步反向PCR扩增后均得到441bp的DNA片段,测序分析表明分别为sTALL-2第187位谷氨酰胺残基置换为Ser、Asp、Arg的序列,3种突变体蛋白在大肠杆DH5α中获得成功表达,并得以有效纯化.结论 成功制备了sTALL-2的3种突变体蛋白,为进一步探讨sTALL-2结构与功能的关系及寻找基于sTALL-2突变体的抗肿瘤分子奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何凤田	第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室	127	592	12.0	15.0
2	李蓉芬	第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室	38	166	7.0	11.0
3	郑英如	第三军医大学大坪医院野战外科研究所妇产科	67	410	12.0	17.0
4	黄刚	第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室	21	72	5.0	8.0
5	龚薇	第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室	19	67	5.0	7.0
6	刘宝英	第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室	5	1	1.0	1.0