AMP激活的蛋白激酶α2大肠杆菌双杂交诱饵重组质粒的构建及鉴定

• 作者: 符庆瑛 高钰琪
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: AMP激活的蛋白激酶 大肠杆菌双杂交 诱饵质粒
• 年，卷（期）: 2006,（19）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 1923-1926
• 页数: 4页
• 分类号: R378.21|Q555.7|Q78
• 字数: 3611字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2006.19.001

摘要

目的 构建大肠杆菌双杂交系统的诱饵重组质粒.方法 PCR扩增大鼠AMP激活的蛋白激酶α2(AMP-activated protein kinase α2,AMPKα2)蛋白编码区cDNA,与大肠杆菌双杂交表达载体pBT构建融合蛋白表达质粒pBTAMPKα2.经酶切和测序鉴定后,将pBT-AMPKα2转化XL-1 Blue MRF'大肠杆菌报告菌株,检测诱饵融合蛋白的表达.并用pBT-AMPKα2和pTRG空载体共转化XL-1 Blue MRF'菌株,通过3-氨基-1,2,4-三唑(3-amino-1,2,4-triazole,3-AT)选择性筛选平板检测诱饵融合蛋白的自激活作用.结果 酶切和测序结果表明AMPKα2蛋白编码序列成功克隆入pBT载体,融合区阅读框正确.诱饵重组质粒pBT-AMPKα2能表达λcL/AMPKα2融合蛋白.转化有pBT-AMPKα2和pTRG空载体的XL-1 Blue MRF'大肠杆菌报告菌株在3-AT选择性筛选平板上不生长,而在no 3-AT非选择性筛选平板上生长良好,表明pBT-AMPKα2重组质粒能在大肠杆菌细胞中正确表达且无自激活作用.结论 构建的pBT-AMPKαt2诱饵重组质粒可用于下一阶段的cDNA文库筛选.