单纯疱疹病毒胸苷激酶基因重组真核表达载体的构建及在烫伤大鼠皮肤组织中的表达

• 作者: 杨磊 王甲汉 高建华
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 基因疗法 成纤维细胞 烧伤 胸苷激酶
• 年，卷（期）: 2006,（12）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 95-97,插3
• 页数: 4页
• 分类号: R826.5
• 字数: 5467字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2006.12.042

摘要

目的:构建单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因重组真核表达载体pcDNA3.1/HSV-tk,并观察其在烫伤大鼠皮肤中的表达.方法:实验于2003-07/12在解放军第一军医大学热带卫生学系实验室进行.在原核表达质粒pUChHyTk基础上,利用分子克隆技术,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1/HSV-tk.取20只Wistar大鼠,全麻后背部浸入95℃水浴锅中,烫伤12 s,造成30%Ⅲ度烫伤,烫伤后随机分为两组(n=10):①pcDNA3.1/tk组:烫伤后当天及第1,2,3,4周后于大鼠左后背部创面边缘(距创面边缘0.5 cm)皮下注射脂质体和重组质粒的混合物192μL[3.6μg pcDNA3.1/tk(2μL)+10μL脂质体+180μL生理盐水].②pcDNA3.1组:注射时间和方法同前,脂质体和质粒混合物为3.0 μgpcDNA3 1(2μL)+10μL脂质体+180μL生理盐水.伤后5周断头处死大鼠,取注射点附近皮肤,用反转录-聚合酶链反应法检测HSV-tk基因的表达.结果:20只大鼠全部进入结果分析.大鼠重组质粒经酶切鉴定与预期结果一致,DNA测序结果表明tk基因已正确插入到pcDNA3.1质粒,说明了重组真核表达载体pcDNA3.1/HSV-tk已成功构建.反转录-聚合酶链反应结果显示脂质体介导的HSV-tk基因转移可在创面成纤维细胞中出现阳性表达.结论:应用分子克隆技术成功地构建了重组真核表达载体pcDNA3.1/HSV-tk,并在烫伤大鼠皮肤中得到了阳性表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高建华	南方医科大学南方医院烧伤整形中心	141	942	15.0	21.0
2	杨磊	南方医科大学南方医院烧伤整形中心	55	328	10.0	14.0
3	王甲汉	南方医科大学南方医院烧伤整形中心	83	597	12.0	18.0