单纯疱疹病毒胸苷激酶与绿色荧光蛋白基因真核共表达质粒的构建

• 作者: 刘启才 吴世卿 张积仁 曾曙光 章锦才 艾伟健
• 来源期刊: 中山大学学报(医学科学版)
• 学科: 医学
• 关键词: HSV-TK/EGFP基因 内部核糖体进入位点 真核表达
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 技术研究
• 页码范围: 117-120,封3
• 页数: 5页
• 分类号: R394.34
• 字数: 3852字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1672-3554.2009.01.027

摘要

[目的]构建含有人巨细胞病毒(CMV)调控表达的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因真核表达质粒pCMV-TK-IRES-EGFP.[方法]设计HSV-tk cDNA的特异引物,PCR扩增获得HSV-tk基因序列,将PCR产物进行T载体克隆获得重组质粒pMD18T-TK,测序分析选定序列正确的克隆提取质粒,用限制性内切酶Sal Ⅰ和BamH 1分别酶切pMD18T-TK和pCMV-IRES-EGFP质粒,将HSV-tk基因定向亚克隆至pCMV-IRES-EGFP载体,酶切鉴定,构建获得含EGFP和HSV-tk基因的重组质粒,Lipofectin介导转染小鼠黑色素瘤B16细胞并检测其表达情况.[结果]酶切见特异酶切图谱,该质粒在瞬时表达时获得EGFP的良好表达.[结论]含HSV-tk和EGFP基因真核表达质粒pCMV-TK-IRES-EGFP构建成功,为利用绿色荧光蛋白标记在后续实验中进行自杀性基因治疗的深入研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘启才	广州医学院实验医学研究中心	83	316	10.0	13.0
2	张积仁	南方医科大学珠江医院肿瘤中心	167	747	12.0	19.0