丙型肝炎病毒NS5A反式激活蛋白7的重组表达及生物信息学分析

• 作者: 张延峰 成军 李晓光 洪源 王慧芬 郑铁龙
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝炎病毒 NS5A 反式激活 原核表达 计算生物学
• 年，卷（期）: 2007,（10）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1028-1030
• 页数: 3页
• 分类号: R512.63
• 字数: 2994字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2007.10.008

摘要

目的 构建丙型肝炎病毒NS5A反式激活蛋白7(NS5ATP7)的原核表达载体,诱导其在大肠埃希菌中的表达,并初步探讨其结构与功能.方法 应用逆转录PCR(RT-PCR)技术,以HepG2细胞mRNA为模板,扩增获得NS5ATP7基因片段,连接到pGEM-T载体,酶切鉴定及测序正确后插入至原核表达载体pET-32a(+)中,转化大肠埃希菌BL21,IPTG诱导以获得NS5ATP7融合蛋白的表达,SDS-PAGE、Western blot免疫印迹分析和证实该融合蛋白表达的特异性,并应用生物信息学方法对该融合蛋白的结构和功能进行预测.结果 利用RT-PCR扩增获得大小为891bp的NS5ATP7基因片段,插入pET-32a(+)表达载体,转化BL21宿主菌,经IPTG诱导,成功获得了大小为48kD的目的蛋白,Western blot进一步证实了该蛋白具有特异性免疫反应识别.生物信息学预测结果显示此蛋白富含螺旋结构,为非跨膜蛋白,无信号肽.结论 利用大肠埃希菌BL21成功表达了NS5ATP7融合蛋白,结合生物信息学分析结果,为研究NS5ATP7蛋白的免疫原性和生物学特性奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	成军	北京地坛医院传染病研究所	210	843	13.0	20.0
2	洪源	北京地坛医院传染病研究所	44	70	5.0	6.0
3	王慧芬	解放军第302医院肝衰竭治疗研究中心	75	850	14.0	26.0
4	郑铁龙	北京地坛医院传染病研究所	5	9	2.0	2.0
5	张延峰	北京地坛医院传染病研究所	1	3	1.0	1.0