来源于产气肠杆菌的嘧啶核苷磷酸化酶基因在大肠杆菌BL21中的表达

• 作者: 倪孟祥 吴梧桐 葛亚文 魏元刚
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 嘧啶核苷磷酸化酶 克隆表达 大肠杆菌 产气肠杆菌 发酵条件
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 94-98
• 页数: 5页
• 分类号: Q55
• 字数: 2646字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-8915.2007.02.004

摘要

实现产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)嘧啶核苷磷酸化酶(Pyrimidine-nucleoside phosphorylase,PyPNase)基因在大肠杆菌中的高效表达.用来源于产气肠杆菌的核苷磷酸化酶N末端序列与NCBI中公布的已知序列进行比对,设计一对引物,以该菌株基因组DNA为模板扩增出PyPNase基因.定向克隆到PET-28a(+)载体后转化到表达宿主大肠杆菌BL21中,筛选阳性克隆并测序,然后在LB培养基中优化发酵条件.结果:目的基因片断长度为1 302 bp.表达产物经SDS-PAGE和酶活测定表明PyPNase基因在大肠杆菌中获得活性表达,43 ku处有表达蛋白.37℃培养2 h至对数生长中期,降温到31℃,0.1mmol/L IPTG诱导5 h获得最大酶活力为512.3 U/mg,为出发菌株的17.2倍.重组PyPNase的成功表达为今后大规模生产5-FUR打下了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴梧桐	中国药科大学微生物制药教研室	256	2771	24.0	37.0
2	倪孟祥	中国药科大学微生物制药教研室	54	283	11.0	15.0
3	魏元刚	中国药科大学微生物制药教研室	3	21	3.0	3.0
4	葛亚文	中国药科大学微生物制药教研室	3	13	2.0	3.0