转基因作物标记蛋白HPT融合表达载体构建、纯化及复性研究

• 作者: 卓勤 朴建华 杨晓光 王锐 田园
• 来源期刊: 卫生研究
• 学科: 工学
• 关键词: 潮霉素磷酸转移酶 安全性评价 融合蛋白 包涵体 复性
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 26-30
• 页数: 5页
• 分类号: Q753|Q555.7|TS201.6
• 字数: 6304字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-8020.2007.01.008

摘要

目的 潮霉素磷酸转移酶基因(hpt)是转基因作物中广泛应用的抗生素标记基因,本研究构建该基因的融合表达载体,以期得到足量纯化的HPT蛋白,为该外源蛋白的进一步安全性评价奠定基础.方法 将hpt基因克隆到线性表达载体pET41 EK/LIC中,得到该基因的融合表达载体pET41EK/HPT,将pET41EK/HPT载体转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,沉淀中的包涵体进行了稀释复性、柱上复性和N-十二烷基肌氨酸钠(SKL)溶解稀释复性等复性研究及活性测定、标签切除、N端测序等工作.结果 融合蛋白主要以无活性的包涵体形式存在,各复性方法表明SKL溶解稀释复性得到的蛋白在活性及产率方面明显高于其他两种方法,利用该方法每升培养物可获得78mg活性HPT融合蛋白,纯度约为93%,经肠激酶切割后,得到的蛋白与天然HPT蛋白N端氨基酸序列完全相同.结论 利用本研究方法可得到在活性、分子量及氨基酸序列等方面与天然HPT蛋白一致的目的蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朴建华	中国疾病预防控制中心营养与食品安全所	125	1563	22.0	35.0
2	杨晓光	中国疾病预防控制中心营养与食品安全所	196	3171	30.0	48.0
3	田园	中国疾病预防控制中心营养与食品安全所	18	133	6.0	11.0
4	卓勤	中国疾病预防控制中心营养与食品安全所	59	467	14.0	20.0
5	王锐	中国疾病预防控制中心营养与食品安全所	32	425	11.0	20.0