鼠羧肽酶原B在毕赤酵母中的表达、纯化与鉴定

• 作者: 方宏清 李彦英 王德解 苗林 陈宏 陈惠鹏
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 羧肽酶B 毕赤酵母 表达优化 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 基因工程
• 页码范围: 61-66
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 5029字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2007.01.010

摘要

为了在毕赤酵母中表达鼠羧肽酶原B(procarboxypeptidase B,proCPB)蛋白,以RT-PCR法从SD鼠胰腺细胞中克隆了proCPB基因,将其插入pPIC9载体,PEG1000介导转入毕赤酵母GS115细胞,在甲醇的诱导下,实现了proCPB在毕赤酵母中的成功表达.通过发酵条件的优化,使用BMGY(pH6.0)培养基,添加0.5%的酪蛋白水解物,于28℃,在起始OD600达10.0时,每隔12h补加0.5%的甲醇,重组酵母GS115-proCPB表达的产物量可达到最高(500mg/L),表达时间可达120h,表达的目的蛋白占总蛋白的94%以上.通过纯化条件的优化,采用两步疏水层析,可使目的蛋白的纯度达96%以上,蛋白得率达38%,重组proCPB活化后所得CPB的比活力可达110u/mg(CPB标准品为180u/mg).相对分子量测定表明重组蛋白的分子量与理论值极相近,N-端氨基酸测序进一步表明proCPB基因在毕赤酵母中得到了正确的表达和翻译后加工修饰.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈宏	西北农林科技大学动物科技学院	225	1718	19.0	31.0
2	方宏清	军事医学科学院生物工程研究所	42	245	8.0	13.0
3	陈惠鹏	军事医学科学院生物工程研究所	143	885	15.0	23.0
4	王德解	江西科技师范学院生命科学学院	5	59	5.0	5.0
6	苗林	军事医学科学院生物工程研究所	5	24	4.0	4.0
7	李彦英	军事医学科学院生物工程研究所	11	39	4.0	6.0