人类DLK1基因的克隆、表达、纯化及抗体制备

• 作者: 刘思纯 唐保东 张常然 徐雅
• 来源期刊: 南华大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 人类DLK1基因 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 基础论著
• 页码范围: 820-822,825
• 页数: 4页
• 分类号: Q785
• 字数: 2726字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1116.2007.06.004

摘要

目的 构建人类DLK1基因的原核表达载体,表达并纯化蛋白,制备多克隆抗体,为研究DLK1基因的功能奠定基础.方法 从GenBank中下载人类DLK1基因全长cDNA序列并针对不合信号肽的编码序列设计引物,应用RT-PCR获得目的片段,重组入原核表达载体pET-28a,在大肠杆菌BL-21(DE3)中诱导表达,应用亲和层析法获得重组DLK1蛋白免疫大鼠制备多克隆抗体,用ELISA检测抗体滴度.结果 成功构建了DLK1基因重组表达载体pET-28a-DLK1,表达的重组蛋白纯化经SDS-PAGE鉴定后免疫大鼠,得到了高滴度的多克隆抗体.结论 成功的原核表达载体的构建、重组蛋白的表达纯化及多克隆抗体的制备为进一步研究DLK1基因的功能及其在肝肿瘤中的作用提供了基础.