结核菌抗原基因Rv3881c在大肠杆菌中的高效表达分析

• 作者: 吴雪琼 李大伟 李邦印 王仲元 王臻
• 来源期刊: 实用医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 大肠杆菌 重组融合蛋白质类 Rv3881c H37Rv
• 年，卷（期）: 2007,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1605-1607
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 字数: 2919字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2007.11.003

摘要

目的:从结核分枝杆菌基因组克隆Rv3881c基因并重组入pET24b载体,在大肠杆菌中进行融合表达,重组蛋白经纯化后通过Western blot分析初步鉴定其抗原性和特异性.方法:提取H37Rv标准株的基因组DNA,以基因组DNA为模板PCR扩增出Rv3881c基因,连接到pGEMT上,经过筛选鉴定后,将重组子测序;将测序正确的基因双酶切后连接到pET24b载体上,筛选得到重组载体pET24b-48;在BL21菌株中优化表达并采用金属鍪合层析方法纯化蛋白;选取6例结核病阳性临床血清标本和6例健康人血清标本进行Western blot分析.结果:发现从保存的H37Rv菌株克隆得到了读码框完全正确的Rv3881c基因,它在大肠杆菌中可以高效表达,表达量约占细菌总蛋白的20%以上.重组蛋白不与健康人血清反应,可与结核标本血清有较强的免疫印迹反应.结论:重组Rv3881c具有较好的特异性,该抗原有潜力成为检测结核的有效抗原组分之一.