Rv1196基因克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

• 作者: 吴雪琼 李大伟 李洪敏 李邦印 王仲元 王臻
• 来源期刊: 广东医学
• 学科: 医学
• 关键词: Rv1196 大肠杆菌 基因表达
• 年，卷（期）: 2007,（8）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1223-1225
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 字数: 2791字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-9448.2007.08.007

摘要

目的 用PCR方法从结核菌基因组中扩增Rv1196基因,将之重组到pET24b载体,在大肠杆菌中进行融合表达,重组蛋白纯化后通过免疫印迹反应初步鉴定其抗原性和特异性.方法 提取H37Rv标准株的基因组DNA;设计Rv1196基因两端的引物,通过PCR方法从基因组DNA中扩增出Rv1196抗原的基因,直接连接到pGEMT载体上,经过筛选鉴定后,将重组子测序;将测序的质粒用NdeI和XhoI双酶切后连接到pET24b载体上,筛选得到重组载体pET24b-39;转化BL21并优化表达条件,采用金属鏊合层析纯化重组蛋白;选取7例结核病阳性临床血清标本和7例健康人血清标本进行Western blot分析.结果 获得了氨基酸编码序列正确的基因,与数据库中报道一致;Rv1196基因能够在大肠杆菌中高效表达,其表达量约占细菌总蛋白的30%以上;重组抗原不与健康人血清反应,但与结核标本血清呈强烈反应.结论 重组Rv1196抗原具有较好的特异性和抗原性,有较好的血清学分析价值.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李洪敏	解放军总医院第二附属医院结核病研究所	12	27	3.0	4.0
2	王仲元	解放军总医院第二附属医院结核病研究所	22	99	5.0	9.0
3	吴雪琼	解放军总医院第二附属医院结核病研究所	16	62	4.0	7.0
4	李大伟	解放军总医院第二附属医院结核病研究所	16	90	6.0	9.0
5	李邦印	解放军总医院第二附属医院结核病研究所	3	4	1.0	2.0
6	王臻		1	0	0.0	0.0