SOEing 法构建EGFP真核表达载体及其在杜氏盐藻中的表达

• 作者: 刘红涛 曲东京 李杰 薛乐勋 闫红霞 鲁照明
• 来源期刊: 水生生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 杜氏盐藻 重叠区扩增基因拼接法(SOEing) 增强型绿色荧光蛋白(EGFP) 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 页码范围: 546-551
• 页数: 6页
• 分类号: Q754
• 字数: 4648字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3207.2007.04.015

摘要

通过重叠区扩增基因拼接法(Gene splicing by overlap extension, SOEing)构建含有杜氏盐藻(Dunaliella salina)硝酸盐还原酶(NR)基因5'-上游序列(Pnr)and 3'-端序列(Tnr)的EGFP真核表达载体,并将其转化杜氏盐藻.利用改进的SOEing法,将杜氏盐藻NR基因Pnr与报告基因EGFP cDNA融合,并与pEGM-7zf克隆载体连接,顺序将盐藻NR基因Tnr序列与融合片段相连,构建含Pnr-EGFP-Tnr表达盒的盐藻真核表达载体p7NET.电击法转化杜氏盐藻,在盐藻转化株中观察到了EGFP的瞬时表达.此研究为转基因杜氏盐藻研究和成功建立杜氏盐藻生物反应器奠定了实验基础.