CYP2B6基因表达质粒的构建及在大肠杆菌中的表达

• 作者: 张宝 彭琳 徐锡金 郑谨 霍霞 齐宗利
• 来源期刊: 汕头大学医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: CYP2B6 大肠杆菌 表达
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 1-4
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 2694字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-4716.2007.01.001

摘要

目的:构建CYP2B6基因原核表达质粒,在大肠杆菌[Rosetta2(DE3)pLysS]中高效表达重组蛋白.方法:以质粒为模板,用PCR技术扩增出CYP2B6基因,并将其分别插入pET-22b( + )、pET-28b( + )和pET-32a( + )质粒中,经PCR、测序鉴定后,转化Rosetta2(DE3)pLysS,并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.结果:经PCR、测序鉴定,构建了CYP2B6基因表达质粒;采用考马斯亮蓝染色法检测重组蛋白表达,pET-22b( + )-CYP2B6未见目的蛋白表达;pET-28b( + )-CYP2B6有目的蛋白表达,约占蛋白总量的5%;而pET-32a( + )-CYP2B6可以高效地表达CYP2B6,在低浓度(50 μmol/L)IPTG诱导3 h后,所表达的CYP2B6蛋白约占细菌总蛋白的30%;质谱分析结果进一步证实所表达的蛋白为CYP2B6.结论:成功地使CYP2B6基因在原核系统中高效表达.