全人源食管癌单链抗体scFv基因文库的构建

• 作者: 唐树彬 庞华 彭志平 李少林 段红
• 来源期刊: 肿瘤防治研究
• 学科: 医学
• 关键词: 噬菌体抗体库 单链抗体 食管癌 基因工程抗体
• 年，卷（期）: 2007,（7）
• 所属期刊栏目: 临床研究
• 页码范围: 486-489
• 页数: 4页
• 分类号: R735.1
• 字数: 3445字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3971/j.issn.1000-8578.2007.07.005

摘要

目的 制备全人源化食管癌单链抗体scFv基因文库.方法 取食管癌病人癌肿周围淋巴结作为B细胞的来源,提取总RNA,用RT-PCR的方法获得抗体可变区基因cDNA文库.首先分别网格筛选确定扩增VH和VL基因片段的引物对,以cDNA为模板扩增VH和VL基因片段,再以它们为模板分别扩增VH-linker与VL-linker,用SOE-PCR技术将它们拼接成scFv,再引入酶切位点Sfi Ⅰ和Not Ⅰ,胶回收PCR产物获得scFv.将scFv基因克隆入噬菌粒裁体pCANTAB-5E后电转入Ecoli TG1.PCR法鉴定抗体基因插入率,1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定阳性克隆酶切产物.结果 食管癌周围淋巴结的提取总RNA琼脂糖电泳结果中可见清晰的28S、18S条带;VH基因的大小约为450bp,VL基因为350bp,组装后的scFv基因约为850bp.PCR连接产物的转化效率为2×107 cfu/μg,scFv的阳性插入率为91.7%(22/24).结论 食管癌相关的人源单链抗体基因文库的构建为进一步筛选单链抗体库奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李少林	重庆医科大学核医学教研室	232	1134	14.0	22.0
2	庞华	重庆医科大学核医学教研室	53	201	7.0	11.0
3	彭志平	重庆医科大学核医学教研室	45	167	8.0	10.0
4	段红	重庆医科大学病理生理教研室	31	143	6.0	10.0
5	唐树彬	重庆医科大学核医学教研室	4	7	2.0	2.0