重组人成熟型转化生长因子β1及其抗原表位在大肠杆菌中的表达、纯化及其免疫原性鉴定

• 作者: 姜昌丽 张英起 韩苇 颜真
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 转化生长因子 抗原表位 自体疫苗
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 77-80
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3212字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-5503.2007.02.002

摘要

目的 研制人转化生长因子(TGF)-β1自体蛋白疫苗,并诱导小鼠产生抗人TGF-β1的中和抗体.方法 将hTGF-β1及其抗原表位基因β32和β80分别克隆入pGEX-4T-1原核表达载体,并引入T细胞辅助表位(TT),转化大肠杆菌,经IPTG诱导表达.应用GST亲和层析纯化重组融合蛋白,并经Western blot鉴定,用流式细胞术(FCM)检测抗hTGF-β1抗血清与人肝癌细胞株SMMC-7721表面膜型TGF-β1的结合状况.用纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,通过ELISA检测血清中抗hTGF-β1抗体的效价.结果 成功构建了人成熟型TGF-β1及其不同表位基因片段的重组表达质粒pGEX-TT-β32、pGEX-TT-β80和pGEX-TT-hTGF-β1,表达的3种重组蛋白(GST-TT-β32、GST-TT-β80和GST-TT-hTGF-β1)经Western blot鉴定显示,同时具有hT-GF-β1和GST的抗原性.经纯化后免疫BALB/c小鼠,血清抗人TGF-β1抗体的效价均达到1∶104,其中GST-TT-β80的抗体效价最高.FCM显示3种重组蛋白免疫的小鼠抗血清均能与高表达膜型TGF-β1的人SMMC-7721结合,但重组蛋白GST-TT-β80和GST-TT-hTGF-β1免疫组抗血清的结合率明显高于GST-TT-β32组.结论 构建的人成熟型TGF-β1及其不同表位片段的不同融合蛋白疫苗均能够诱导BALB/c小鼠产生抗人TGF-β1的中和抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	颜真	第四军医大学药学系生物技术中心肿瘤生物学国家重点实验室	84	776	12.0	25.0
2	张英起	第四军医大学药学系生物技术中心肿瘤生物学国家重点实验室	124	825	12.0	23.0
3	韩苇	第四军医大学药学系生物技术中心肿瘤生物学国家重点实验室	46	459	9.0	20.0
4	姜昌丽	第四军医大学药学系生物技术中心肿瘤生物学国家重点实验室	4	8	1.0	2.0