结核分枝杆菌复活促进因子E的原核表达及纯化

• 作者: 何永林 徐蕾 朱道银 李娜 王瑜伟
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 复活促进因子E 原核表达
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 252-255
• 页数: 4页
• 分类号: Q786|R378.91+1
• 字数: 3036字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-5503.2007.04.006

摘要

目的 构建结核分枝杆菌复活促进因子E(RpfE)的原核表达质粒,在大肠杆菌中表达并纯化.方法 采用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出RpfE基因,双内切酶消化后,与同样酶消化的pET32a(+)载体连接,转化大肠杆菌Top10.阳性克隆经酶切和DNA测序鉴定正确后,将重组质粒转化至大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导,由T7启动子调控表达RpfE蛋白,并对表达蛋白进行鉴定和纯化.结果 双酶切鉴定所切下的片段大小与预期相符,测序结果与文献报道一致.经SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,在相对分子质量41 000处均可见特异性蛋白条带.经Ni2+-NTA金属螯合层析后,重组蛋白纯度可达90%以上.结论 已成功地克隆并构建了RpfE基因的重组表达质粒pET32a(+)-RpfEv,并获得了高纯度的重组蛋白,为以后的深入研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱道银	重庆医科大学微生物学与免疫学教研室	113	510	10.0	15.0
2	何永林	重庆医科大学微生物学与免疫学教研室	49	129	6.0	7.0
3	李娜	重庆医科大学微生物学与免疫学教研室	63	261	9.0	11.0
4	王瑜伟	重庆医科大学微生物学与免疫学教研室	15	21	3.0	3.0
5	徐蕾	重庆医科大学微生物学与免疫学教研室	38	81	5.0	6.0