蚯蚓纤溶酶基因(Efp-Ⅰ)在大肠杆菌中的克隆、表达及活性分析

• 作者: 侯艳 李晓霞 赵晓瑜 静天玉
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 赤子爱胜蚓 蚯蚓纤溶酶 基因克隆 融合表达 纤溶酶活性
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 基因工程
• 页码范围: 452-456
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 3979字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2007.03.017

摘要

从GenBank查询到的蚯蚓纤溶酶earthworm fibrinolytic enzyme,EFE)基因序列中,只有AY438624翻译的蛋白质序列与天然EfP-Ⅰ在N-端具有较高的相似性.根据该基因的5'与3'序列设计引物,通过RT-PCR从赤子爱胜蚓(Eisenia fetida)获得一个完整的基因(GenBank,DQ418454).序列分析证明,由该基因编码蛋白质的N-末端与天然EfP-Ⅰ的N-末端的氨基酸顺序完全相同.SeanPmsite prediction programs分析显示,该基因与AY438624相似性极高,二者均属于胰蛋白酶家族;不同的是,该基因编码蛋白质的序列中含有N-糖苷键的结构域,所以DQ418454是Efp-Ⅰ中的一个新基因.在此基础上,构建了该基因的原核表达裁体pMAL-c2X-Efp-Ⅰ,并进行了转化、诱导和表达.Western blotting证明,表达产物同时具有MBP和Efp-Ⅰ的抗原特异性,是MBP和Efp-Ⅰ的融合蛋白(MBP-EfP-Ⅰ).经亲和层析分离纯化的MBP-EfP-Ⅰ,在酪蛋白平板和纤维蛋白平板上表现出明显的纤溶酶活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵晓瑜	河北大学生命科学学院	83	757	15.0	23.0
2	李晓霞	河北大学生命科学学院	11	25	3.0	4.0
3	静天玉	河北大学生命科学学院	20	170	7.0	12.0
4	侯艳	河北大学生命科学学院	5	7	2.0	2.0