实时荧光定量PCR检测人APRILmRNA的标准品构建

• 作者: 张冬雷 王惠民 王旭东 王行 祝文彩 鞠少卿
• 来源期刊: 交通医学
• 学科: 医学
• 关键词: 增殖诱导配体 聚合酶链反应 质粒标准品 T-A克隆
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 论著与基础研究
• 页码范围: 14-16
• 页数: 3页
• 分类号: R4
• 字数: 2321字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-2440.2007.01.006

摘要

目的:构建增殖诱导配体(APRIL)基因的重组质粒的标准品.方法:从肺癌的组织标本中抽提总RNA逆转录合成cDNA,以cDNA为模板扩增目的片段,从胶中回收目的片段,再将回收的目的片段与pGEM-T Easy载体连接并转化宿主菌DH-5α,分别用菌落PCR及测序两种方法证实目的片段已成功转染细菌.抽提重组质粒DNA用核酸分析仪测浓度后换算成copies/ml.结果:成功构建了APRIL实时荧光定量标准品的线性范围105～1012copies/ml,批内与批间CV分别为1.34%～3.07%和7.24%～11.41%.结论:该法制备的质粒标准品具有较好的灵敏度和重复性,满足实时荧光定量实验要求.