SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测生存素基因的方法建立及条件优化

• 作者: 李一荣 程正江 胡丽华 黄少军
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 聚合酶链反应 基因 生存素
• 年，卷（期）: 2007,（12）
• 所属期刊栏目: 临床实验诊断研究
• 页码范围: 1364-1367
• 页数: 4页
• 分类号: R4
• 字数: 2687字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1009-9158.2007.12.011

摘要

目的 建立SYBR Green Ⅰ染料实时定量PCR检测生存素(Survivin)基因定量的方法.方法 根据PCR产物荧光强度、循环阈值(Ct值)、标准曲线斜率、相关系数和熔解曲线优化反应体系中各组分的量及反应条件,对引物二聚体消除策略和Ct值获取方式进行评价.并用该方法检测43份胃癌组织Survivin基因扩增情况.结果 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR体系扩增Survivin的最佳组成和条件是:Taq酶2.5 U/100μ1、MgCl2 2 mmol/L、引物浓度0.2 μmol/L和退火温度58℃;在PCR循环延伸结束后设置1个低于特异产物退火温度值2℃的荧光读取温度,能有效消除引物二聚体对定量检测的影响;以二次倒数最大值方式确定Ct值,能避免主观因素所致误差.研究建立的SYBR Green Ⅰ染料实时定量PCR检测Survivin基因含量方法的灵敏度为10拷贝/μl,线性范围101～104拷贝/μl(r=0.999 7),批内变异系数(CV)1.13%～1.91%,批间CV 3.31%～4.50%;胃癌组织中Survivin基因扩增率为13.9%(6/43).结论 优化后的SYBR Green Ⅰ实时定量PCR方法具有方便、经济、灵敏度高和重复好等特性,可用于Survivin基因含量分析.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡丽华	华中科技大学同济医学院附属协和医院检验科	219	1037	13.0	23.0
2	李一荣	华中科技大学同济医学院附属协和医院检验科	53	158	6.0	8.0
3	黄少军	华中科技大学同济医学院附属襄樊医院检验科	6	16	2.0	4.0
4	程正江	华中科技大学同济医学院附属协和医院检验科	6	18	2.0	4.0