ILKmRNA在结肠癌细胞株中的表达及其稳定表达的RNA干扰载体构建

• 作者: 杨凤武 梁后杰
• 来源期刊: 中国肿瘤
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 载体构建 RT-PCR 整合素连接激酶
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 275-278
• 页数: 4页
• 分类号: R73-36
• 字数: 3022字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-0242.2007.04.023

摘要

[目的]检测结肠癌细胞株中ILK的mRNA水平,并构建针对ILK基因的特异性RNA干扰(RNAi)表达载体.[方法]通过RT-PCR检测ILK基因在三种结肠癌细胞株(SW480、LO-VO及HT29)mRNA的表达;根据GenBank提供的ILK基因mRNA序列,设计具有小发夹结构的两条DNA序列,化学合成后经退火形成双链DNA片段,连接到经HindⅢ/BglⅡ酶切线性化的pSUPER-neo-EGFP/H1(pSNE/H1)质粒上,形成重组载体pSNE-ILK,转化大肠杆菌DH5α,提取质粒经HindⅢ/EcoRⅠ双酶切鉴定和测序鉴定,稳定转染结肠癌细胞HT29.[结果]①RT-PCR检测,ILK基因在三种结肠癌细胞株中均有表达,ILK/β-actin电泳条带强度比:SW480为0.63,HT29为0.65,LO-VO为033.②成功构建了针对ILK基因的特异性RNA干扰载体pSNE-ILK和对照的无关基因载体pSNE-Control,并稳定转染结肠癌细胞株HT-29.[结论]成功构建了针对ILK基因的特异性RNAi载体,并稳定转染HT29细胞,能有效抑制ILK基因,为下一步探讨ILK基因在结肠癌进程中的作用和结肠癌的基因治疗奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梁后杰		197	911	14.0	18.0
2	杨凤武		2	7	2.0	2.0