人PTP1B真核载体在COS-7细胞中的表达及其体外抑制剂实验

• 作者: 张吕钊 李俊 鲁云霞
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 蛋白质酪氨酸磷酸酶/拮抗剂和抑制剂 COS细胞 基因表达 遗传载体
• 年，卷（期）: 2007,（5）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 477-481
• 页数: 5页
• 分类号: R345.61|R329.24|R341|R394
• 字数: 3553字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1492.2007.05.001

摘要

目的 构建人蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)真核表达载体pcDNA3.1-hPTP1B并在猴肾成纤维细胞COS-7中稳定表达,分离纯化表达的重组融合蛋白,进行酶活性测定及抑制剂的初步实验.方法 应用RT-PCR从2型糖尿病患者的外周血总RNA中扩增出PTP1B cDNA全长序列,并在基因上下游分别引入BamH Ⅰ、EcoR Ⅰ两个酶切位点,酶切后定向导入pcDNA3.1/Hismyc-B多克隆位点,构建真核表达载体pcDNA3.1-hPTP1B,转染COS-7细胞,G-418筛选2周后取细胞裂解上清液经Ni2+亲和层析柱纯化后,测定了其酶活性及小分子抑制剂钒酸钠的IC50.结果 从2型糖尿病患者外周血中扩增得到1 301 bpPTB1B cDNA全长序列,经双酶切鉴定及测序分析,表明hPTP1B已克隆到poDNA3.1/Hismyc-B中.RT-PCR和免疫印迹表明转染成功.酶活性实验初步显示rhPTP1B的活性随酶浓度增加而增加,随PTP1B的特异性抑制剂钒酸钠的浓度增加而减少.结论 获得具有酶活性的融合蛋白rhPTP1B,为进一步筛选其特异性抑制剂奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李俊	安徽医科大学药学院	493	5712	35.0	53.0
2	鲁云霞	安徽医科大学生化教研室	48	229	8.0	12.0
3	张吕钊	安徽医科大学药学院	3	32	2.0	3.0