SV40T抗原胃壁细胞特异性表达载体的构建与鉴定

• 作者: 乐晓平 侯艺芳 张钦宪 金辉 陈辉 马慧洁
• 来源期刊: 世界华人消化杂志
• 学科: 医学
• 关键词: SV40病毒 T抗原 真核表达 载体构建
• 年，卷（期）: 2007,（18）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 2004-2008
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 3739字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-3079.2007.18.006

摘要

目的:构建在胃壁细胞中特异性表达SV40T抗原的真核表达载体并进行鉴定.方法:采用酚-氯仿法从昆明小鼠肝细胞中提取基因组DNA,聚合酶链式反应(PCR)扩增H+/K+ATPase β亚基启动子,产物命名为HK.将PCR产物纯化回收后与pMT18-T载体相连,并将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-),构建pcDNA3.1(-)/HK;从含SV40T基因片段的质粒pLITAg中酶切回收SV40T基因,与pcDNA3.1(-)/HK相连,构建胃壁细胞特异性表达载体pcDNA3.1(-)/HKSV,并测序鉴定.结果:pcDNA3.1(-)/HKSV用Xba Ⅰ、BamH Ⅰ双酶切可得到1 kb H+/K+ATPase β亚基启动子,2.7 kb SV40T基因与5.4 kb pcDNA3.1(-)载体3条DNA条带.用Xba Ⅰ、Kpn Ⅰ双酶切电泳,可见到约3.7与5.4 kb的两条DNA条带;用BamH Ⅰ单酶切电泳,可见到2.7与6.4 kb的2条DNA条带;用EcoR Ⅰ单酶切,只见到约9.1 kb的1条DNA条带,酶切电泳结果均与设计一致.测序结果显示,H+/K+ATPase β亚基启动子与SV40T基因成功构建于pcDNA3.1(-)真核表达载体中.结论:构建在胃壁细胞中特异性表达SV40T基因的真核表达载体,为进一步转基因小鼠及胃癌动物模型的建立提供了稳定、可靠的分子工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	金辉	郑州大学基础医学院组织胚胎学教研室	23	65	4.0	7.0
2	张钦宪	郑州大学基础医学院组织胚胎学教研室	126	523	10.0	15.0
3	乐晓平	郑州大学基础医学院组织胚胎学教研室	4	17	2.0	4.0
4	侯艺芳	郑州大学第一附属医院妇产科	7	35	4.0	5.0
5	马慧洁	郑州大学基础医学院组织胚胎学教研室	4	2	1.0	1.0