SV40T抗原荧光真核表达载体构建及在胰岛细胞中的表达

• 作者: 李富荣 谭琪
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 多瘤病毒,弥猴 抗原 聚合酶链反应 荧光抗体技术 胰岛细胞
• 年，卷（期）: 2008,（40）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 7870-7874
• 页数: 5页
• 分类号: R392.4
• 字数: 5031字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.40.026

摘要

背景:有研究表明小鼠胰岛细胞永生化以后增殖能力明显增强,但功能减弱.然而,小鼠的端粒和人类的端粒有差别,大鼠的端粒与人类的相似.目的:设计和构建SV40T荧光真核表达载体,导入大鼠胰岛细胞中进行表达鉴定.设计、时间及地点:细胞观察实验,于2007-10/2008-04在深圳市人民医院中心实验室完成.材料:选用成年雄性SD大鼠2只;pCMV-SV40T质粒:pSC-A质粒;plRES2-ZsGreenl质粒.方法:用Not I和Xho I将SV40T片断从pcMV-SV40T质粒上双酶切下来,同收后克隆到载体pSC-A中成为pSC-SV40T,再用Xho I和Sac II将SV40T片断双酶切下来,回收后正向克隆到荧光真核表达载体plRES2-ZsGreen I中,酶切鉴定重组质粒;用脂质体转染的力法将构建的载体导入原代培养的人鼠胰岛细胞:检测SV40T基因在胰岛细胞中的表达.主要观察指标:绿色荧光蛋白的表达:SV40的转录和翻译.结果:[1]经Xho I和Sac II双酶切后,重组质粒被切成5.3 kb和2.4 kb 2个片段,与理论预期长度相符.[2]pIRES2-ZsGreenl-SV40T重组基因经脂质体法转染,G418筛选,在胰岛细胞内町见绿色荧光,反转录-聚合酶链反应及细胞免疫荧光染色可见SV40T mRNA转录及其蛋白的表达.结论:实验成功构建了SV40T荧光真核表达载体,并可在大鼠胰岛细胞中表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李富荣	暨南大学第二临床学院深圳市人民医院临床医学研究中心	54	265	9.0	12.0
2	谭琪	暨南大学第二临床学院深圳市人民医院临床医学研究中心	1	0	0.0	0.0