马白细胞介素18成熟蛋白(mEIL-18)基因在大肠埃希氏菌中的高效表达与纯化

• 作者: 刘光亮 吴东来 孟庆文 李少英 王群 白宇 童铁钢 肖一红
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: mEIL-18 克隆 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 307-312
• 页数: 6页
• 分类号: S852.4|Q786
• 字数: 3467字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0366-6964.2007.03.018

摘要

用RT-PCR从经ConA刺激的马外周血单个核细胞(PBMC)中扩增出马白细胞介素18(Equine mterleukin-18,EIL-18)前体蛋白(precursor EIL-18,pEIL-18)基因的cDNA,然后克隆至载体pCR2.1-TOPO中,鉴定并命名为pCR2.1-pEIL-18.自pCR2.1-pEIL-18中扩增马白细胞介素18成熟蛋白(mature EIL-18,mEIL-18)基因,并将其亚克隆至原核表达载体pET-28a(+)中.将筛选出的阳性克隆进行测序、诱导表达并纯化其表达产物.结果表明,mEIL-18基因全长474 bp,含1个开放阅读框,编码157个氨基酸的成熟蛋白;表达产物以可溶性和包涵体两种形式存在,经SDS-PAGE和Western-blot分析,重组蛋白相对分子量约为20 ku,且具有免疫生物学活性.mEIL-18基因在大肠杆菌中高效表达并在非变性和变性条件下采用Ni+亲和层析纯化方法获得了高纯度的重组mEIL-18,为探究马白细胞介素18的生物学活性及其应用奠定了基础.