人CCR5Delta32基因重组慢病毒载体的构建及表达

• 作者: 安群星 张献清 张颖 穆士杰 陈蕤
• 来源期刊: 陕西医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 慢病毒属/免疫学 @CCR5Delta32 获得性免疫缺陷综合征 基因表达
• 年，卷（期）: 2007,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1459-1462,1465
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 3450字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-7377.2007.11.001

摘要

目的:构建含人CCR5Delta32基因的重组慢病毒载体并鉴定其表迭性能.方法:从CCR5Delta32突变个体外周血单个核细胞(PBMCs)内提取人基因组DNA,利用PCR技术扩增CCR5Delta32全长基因,经EcoRI单酶切后与pUCm-T栽体连接,随后转化感受态E.coli DH5a,提取质粒进行酶切鉴定及DNA测序.再将鉴定正确的CCR5Delta32基因亚克隆至慢病毒载体pLenti6/V5-D-TOPO并进行酶切鉴定及DNA序列分析.最后用pLPl、pLP2、pLP/VSVG及pLenti-CCR5Delta32四种质粒共转染293T细胞,产生重组慢病毒并通过Western blot鉴定目的基因在靶细胞内的表达.结果:经PCP扩增获得约650bp的DNA片段,测序结果与发表于Gen Bank上的序列完全一致.经酶切鉴定,克隆的目的基因已经正确插入到慢病毒载体pLenti6/V5-D-TOPO中.四种质粒共转染293T细胞,产生出5×105TU/ml高滴度的重组慢病毒.用其感染靶细胞,Western blot结果显示有目的蛋白表达.结论:成功构建了含人CCR5Delta32基因的重组慢病毒裁体并将其在293T细胞内表达,为进一步AIDS基因治疗研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张颖	第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心	73	284	8.0	11.0
2	穆士杰	第四军医大学西京医院输血科	201	760	13.0	18.0
3	张献清	第四军医大学西京医院输血科	176	539	9.0	15.0
4	安群星	第四军医大学西京医院输血科	61	151	7.0	9.0
5	陈蕤	第四军医大学西京医院输血科	30	38	4.0	4.0