结核分枝杆菌Rv1246c和Rv1247c基因的重组质粒构建及蛋白表达

• 作者: 商正玲 姚素霞 张会东 鲍朗
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 Rv1246c Rv1247c 蛋白表达
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 142-145,148
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 3710字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2007.02.011

摘要

目的 应用生物信息学方法分析结核分枝杆菌的Rv1246c和Rv1247c所编码蛋白的结构特征,并对其进行克隆和表达.方法 利用Bioedit、Dnaman及Pfam等对Rv1246c和Rv1247c所表达蛋白结构进行分析;以结核分枝杆菌H37Rv的基因组为模板,用PCR分别扩增Rv1246c和Rv1247c基因片段,并重组到原核表达载体pET32a(+)中,转化E.coli BL21(DH3)菌株,用IPTG诱导蛋白表达.通过SDS-PAGE及Western-blot免疫印迹法检测目的蛋白的表达情况.用纯化蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,间接ELISA检测抗体效价.结果 生物信息学分析表明它们与大肠杆菌的relBE家族有相似的蛋白模块,Rv1246c蛋白与大肠杆菌RelE同源性是21.55%,Rv1247c同源性是23.85%;两个重组质粒构建成功;通过SDS-PAGE检测分别在31kD和29kD处有特异性条带;Western-blot免疫印迹出现特异性阳性信号;间接ELISA检测多克隆抗体效价均大于1∶40 000.结论 本研究首次成功构建了结核分枝杆菌的Rv1246c和Rv1247c的原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达了Rv1246e和Rv1247c蛋白,为进一步研究该组基因的分子功能奠定了良好基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	鲍朗	四川大学华西医学中心感染免疫研究室	84	212	7.0	10.0
2	张会东	四川大学华西医学中心感染免疫研究室	42	109	6.0	8.0
3	商正玲	四川大学华西医学中心感染免疫研究室	16	13	2.0	2.0
4	姚素霞	四川大学华西医学中心感染免疫研究室	6	4	1.0	1.0