靶向载脂蛋白M基因小干扰RNA表达载体构建及其功能

• 作者: 刘芳 潘峰 祝成亮 黄刚
• 来源期刊: 中国动脉硬化杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 生物工程学 RNA干扰 载脂蛋白M 小干扰RNA 表达载体 基因表达 冠心病
• 年，卷（期）: 2007,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 345-348
• 页数: 4页
• 分类号: Q81
• 字数: 3339字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-3949.2007.05.007

摘要

目的 设计和构建载脂蛋白M基因特异性的小干扰RNA体内表达载体,筛选抑制载脂蛋白M表达的有效小干扰RNA,并初步探讨载脂蛋白M的功能. 方法以载脂蛋白M为目的基因,以产生小干扰RNA质粒载体pSilencerTM2.1-U6为表达模板,细胞内转录合成4条小干扰RNA,并构建携带荧光素酶报告基因的重组质粒载体plucF-载脂蛋白.将重组质粒载体plucF-载脂蛋白与产生小干扰RNA的质粒pSilencerTM2.1-U6共转染293T细胞,定量测量荧光素酶活性,初步筛选出抑制荧光素酶表达的有效小干扰RNA,然后将小干扰RNA转染L-02,逆转录聚合酶链反应检测载脂蛋白M mRNA的表达,进一步证实小干扰RNA对载脂蛋白M表达的抑制效果,酶联免疫吸附法检测有效小干扰RNA对载脂蛋白AⅠ、载脂蛋白B和载脂蛋白E合成和分泌的影响. 结果合成的4条小干扰RNA中有2条抑制荧光素酶表达,抑制效率分别为86%和91%,并特异性抑制肝细胞载脂蛋白M mRNA的表达;有效小干扰RNA能够有效抑制载脂蛋白AⅠ合成和分泌(P＜0.05),而载脂蛋白B和载脂蛋白E的含量无明显改变(P＞0.05). 结论成功构建并筛选到针对载脂蛋白M基因表达的有效小干扰RNA质粒,为研究冠心病的发病机制奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	祝成亮	武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室	72	339	10.0	14.0
2	黄刚		47	692	15.0	25.0
3	刘芳	武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室	112	647	14.0	20.0
4	潘峰		55	381	9.0	18.0