大鼠pEGFP-PLZF真核载体的构建及在精原细胞中的表达

• 作者: 叶哲伟 夏伟 曾甫清 白杨 邬喻
• 来源期刊: 南京医科大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 早幼粒细胞白血病锌指蛋白 重组质粒 绿色荧光蛋白 精原细胞
• 年，卷（期）: 2007,（8）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 831-834,842,封3
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 字数: 3409字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-4368.2007.08.015

摘要

目的:构建真核表达重组质粒pEGFP-N1-PLZF,并了解其在大鼠精原细胞中的融合蛋白表达情况.方法:参考分子克隆技术,采用RT-PCR的方法从大鼠睾丸组织中扩增早幼粒细胞白血病锌指蛋白(PLZF),将该基因连接克隆到含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的真核表达载体pEGFP-N1上,并用双酶切、测序进行鉴定;将重组质粒用脂质体转染的方法导入精原细胞中,观察有无荧光的表达及用Western blot检测蛋白表达情况.结果:实验从大鼠睾丸组织中获取了编码plzf基因的全序列cDNA,产生了2 kb的目的插入片段,与pEGFP-N1载体连接后经酶切电泳鉴定及DNA测序证实序列正确;重组质粒转染精原细胞24 h后在荧光显微镜下观察到绿色荧光,并用Western 1blot:检测到106 kD目的蛋白的表达.结论:新构建的重组质粒pEGFP-N1-PLZF通过鉴定,结构正确.转染到精原细胞后能在其中表达,发挥功能,为后续研究奠定了基础,对研究PLZF调控精原细胞增殖和分化机制具有重要的意义.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曾甫清	华中科技大学同济医学院协和医院泌尿外科	253	1463	17.0	24.0
2	叶哲伟	华中科技大学同济医学院协和医院骨科	94	434	10.0	17.0
3	夏伟	华中科技大学同济医学院协和医院泌尿外科	18	83	5.0	8.0
4	白杨	华中科技大学同济医学院协和医院泌尿外科	28	79	5.0	8.0
5	邬喻	华中科技大学同济医学院协和医院泌尿外科	9	62	5.0	7.0