绿荧光蛋白基因质粒表达载体对SACC-83的转染效率及瞬时表达特点

• 作者: 苏涛
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 绿色荧光蛋白质类 癌,腺样囊性 基因 转染 脂质体
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 1087-1090
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 4419字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.06.030

摘要

目的:检测绿荧光蛋白基因(EGFP)质粒表达载体pACCMV-EGFP和pACTERT-EGFP对SACC-83的转染效率及瞬时表达,为应用这两种启动子诱导促凋亡基因转染SACC-83以发挥治疗作用提供依据.方法:实验于2004-07/2005-05在吉林大学口腔医学院口腔生物实验室完成.①在体外扩增并酶切鉴定pACCMV-EGFP和pACTERT-EGFP质粒.②以脂质体介导法转染pACCMV-EGFP和pACTERT-EGFP进入SACC-83细胞,根据质粒和脂质体比例不同分别转染6组,1组:1 g/4 L;2组:1 g/8 L;3组:1g/12 L;4组:2 g/4 L;5组:2 g/8 L;6组:2 g/12 L.③应用荧光显微镜观察各组转染效率及瞬时表达情况,并进行统计学分析.结果:①质粒的检测及鉴定:质粒pACTERT-EGFP和pACCMV-EGFP经转化、酶切电泳证实,均出现约800 bp的片段,与原作者提供的数据一致.②荧光显微镜观察:绿荧光蛋白在基因转染24 h后开始表达,48～72 h最高,1周后表达逐渐减弱.③荧光细胞数的统计学分析:对不同浓度质粒与脂质体转染72 h的荧光细胞数进行方差分析,质粒与脂质体比例为1 g/8 L和2 g/8 L组荧光细胞数显著高于其余各组,其差异具有统计学意义,说明转染效率与脂质体和质粒的比例有关.结论:按照合适的质粒和脂质体比例,pACCMV-EGFP和pACTERT-EGFP转染SACC-83的效率可以达到30%,是转染SACC-83较为理想的瞬时表达载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	苏涛	湖州师范学院医学院	17	75	3.0	8.0