结构域酵母三杂交诱饵载体的构建及酵母转化

• 作者: 何淑雅 刘慧婷 徐向红 李斌元 贾瑜 马云
• 来源期刊: 中国实用医药
• 学科: 医学
• 关键词: FXR1P KH结构域 FXR1PN-端结构域 酵母三杂交 脆性X综合征
• 年，卷（期）: 2007,（22）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-3
• 页数: 3页
• 分类号: R9
• 字数: 2556字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-7555.2007.22.001

摘要

目的 脆性X相关蛋白(FXR1P)是一种RNA结合蛋白,本研究构建了其N-端结构域、KH结构域的酵母三杂交诱饵载体并转化酵母菌株L40 ura3/pHyblex/Zeo-MS2,为筛选这2种结构域的相互作用RNA作基础.方法 根据Genebank提供的序列设计引物,以pYESTrp3/FXR1质粒作为模板,扩增分别包含FXR1P N-端结构域、KH结构域的编码区序列,连接到用于酵母三杂交文库筛选的pYESTrp3质粒,得到诱饵质粒,导入大肠杆菌Top10扩增,筛选阳性克隆并提取其中的重组质粒,再转化酵母菌L40 ura3/pHyblex/Zeo-MS2.结果 经过测序验证,该重组诱饵质粒构建成功,转化酵母菌之后对宿主菌无毒性,无自激活现象.结论 成功构建了能用于酵母三杂交文库筛选的FXR1P蛋白N-端结构域、KH结构域酵母三杂交诱饵载体,为研究这两个结构域的RNA结合功能奠定了基础.